細胞培養過(guò)程中污染類(lèi)型分析

細胞培養是指將細胞從動(dòng)物或植物體內取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(cháng)的過(guò)程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過(guò)酶或機械方法進(jìn)行解離，也可以來(lái)源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規培養是在細胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據需要加入細胞培養基，放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中，再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。細胞培養過(guò)程中如果操作不當或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染，常見(jiàn)的污染源有：
 

    1.細菌污染 

    細菌污染是實(shí)驗室細胞培養中常見(jiàn)的污染，即使在細胞培養液中加入了抗菌素，也可能因為操作不慎而引起污染。常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。 

    培養細胞受細菌污染后，會(huì )出現培養液變混濁，pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，后變圓脫落死亡。 

    2.真菌污染 

    真菌污染是細胞培養過(guò)程中常見(jiàn)的一種，常見(jiàn)的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 

    培養細胞受真菌污染后，可見(jiàn)培養液中漂浮著(zhù)白色或淺黃色的小點(diǎn)，有的散在生長(cháng)，培養液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中，有的呈鏈狀排列。 

   真菌污染后，細胞生長(cháng)變慢，但后由于營(yíng)養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。 

    3.支原體污染 

    支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的小微生物，小直徑0.2μm，一般過(guò)濾除菌無(wú)法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結構。開(kāi)始不易發(fā)現，能在偏堿條件下生存，對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。 

    培養細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見(jiàn)細胞生長(cháng)增殖變慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。但多數細胞污染后無(wú)明顯變化，或略有變化，若不及時(shí)處理，還會(huì )產(chǎn)生交叉污染。 

    4.病毒污染 

    組織細胞培養過(guò)程中，如果沒(méi)有除去潛在的病毒，就會(huì )產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養中已發(fā)現不少于20種血清性病毒。 

    盡管病毒污染的細胞不影響原代培養，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。