ELISA試劑盒實(shí)驗稀釋血清的步驟

每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對應的說(shuō)明書(shū)，而每一份說(shuō)明書(shū)里都會(huì )有寫(xiě)樣本和稀釋液的稀釋比例，為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中，將為您分析：為何ELISA實(shí)驗血清樣本都需要稀釋?

在ELISA試劑盒實(shí)驗血清為什么要稀釋?zhuān)坑袃蓚€(gè)原因：
1）競爭抑制比較明顯，應稀釋競爭物；
2）以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來(lái)。血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當然如果你嫌麻煩我覺(jué)得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭，血清的稀釋倍數肯定要事先確定，但也不用一點(diǎn)點(diǎn)，你做一個(gè)預試驗即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來(lái)的曲線(xiàn)比較敏感。

ELISA試劑盒實(shí)驗稀釋血清的步驟：
先把蛋白稀釋一定的倍數，比如說(shuō)10倍、20倍稀釋?zhuān)ㄟ@樣可以大體確定一個(gè)參數），將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應板，再用一定稀釋度的陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結合物進(jìn)行反應，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應后分別測定O.D值，選擇O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為zui適包被濃度。

一般總是要選擇那個(gè)O.D值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。