ELISA實(shí)驗結果為什么有時(shí)候會(huì )復測？

在ELISA實(shí)驗過(guò)程中時(shí)常會(huì )出現復測現象即我們時(shí)常說(shuō)的"花板"現象，這種現象影響檢驗結果的正確判讀，對工作造成一定的不利影響，一旦出現“花板"，實(shí)驗結果必須放棄，重新進(jìn)行，不僅浪費物料和時(shí)間，而且還會(huì )出現樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問(wèn)題。

影響因素分析如下：

一、標本因素

正確處理標本，防止大規模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測，但血清的分離應在抽血后等血液wan全凝固后再離心。

二、試劑因素

正確保存及使用有效試劑。使用過(guò)期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時(shí)間較長(cháng)均影響實(shí)驗結果的準確性。選擇試劑時(shí)應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好，批間差小的試劑。不同廠(chǎng)家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應現用現配，同時(shí)觀(guān)察濃縮洗滌液中有無(wú)結晶，若有結晶應放37℃水浴中融化后才可使用。

三、技術(shù)人員操作因素

嚴格按照相關(guān)實(shí)驗SOP操作實(shí)驗。加樣時(shí)應盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部（注：勿應用力過(guò)度破壞底部包被物質(zhì)），不可加在孔的上部及外部。

四、溫浴的因素

使用水浴箱作為溫浴設備時(shí)，應注意水的深淺對結果的影響，當水浴箱中水的的實(shí)測溫度37℃時(shí)，則水面溫度可能只有34℃，空氣溫度更低，甚至只有二十多度，所以當水浴箱中水位過(guò)低時(shí)則酶標微孔板沒(méi)有浸入水中，則反應溫度會(huì )達不到37℃，相應的就會(huì )影響酶促反應。為防止邊緣效應，酶標板應盡量浸入水中，以保證受熱的均勻。水浴時(shí)，酶標板應封好，以免水滴滴入包被孔中，或陽(yáng)性標本的蒸發(fā)。嚴格掌握溫浴時(shí)間，不可為了早點(diǎn)出結果擅自縮短溫浴時(shí)間。

五、洗板機的因素

廢液瓶裝滿(mǎn)后應及時(shí)清空，以防止廢液回流對管道的污染，而使洗滌不che底，造成“花板"。洗板結束后應用蒸餾水che底清洗管道，以防止廢液在管道中的殘留。同時(shí)應根據儀器維護保養程序，定期對洗板機進(jìn)行維護保養。

六、酶標儀

酶標儀應安置在避光條件下，比色前應提前15-30分鐘開(kāi)機預熱，這樣測定結果會(huì )更穩定。為防止顯色的加深或減弱，顯色時(shí)間完成后應立即滴加終止液（避免氣泡產(chǎn)生），并在10分鐘內完成比色。酶標板從水浴箱取出后應擦凈孔底水滴，若有水滴或紙屑殘留在孔底，會(huì )造成酶標儀讀數錯誤，誤判定為“花板"。