ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項

ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項
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??ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。
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??在檢測時(shí)，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過(guò)反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
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??1. 要留意防止呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因而，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應顯色。
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??2. 冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復倒置混勻即可。
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??3. 標本在保存中如呈現細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應離心沉積后取上清檢測。
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??4. 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染，一則細菌的成長(cháng)，其所分泌的一些酶可能會(huì )對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì )對用相應酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
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??5. 血清標本如是以無(wú)菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長(cháng)期保存，應在-70℃以下。