小鼠血栓調節蛋白(TM)ELISA試劑盒

小鼠血栓調節蛋白(TM)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù)，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經(jīng)使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調查。本法不僅可以用來(lái)測定抗ti，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學(xué)各領(lǐng)域的應用范圍日益擴大，

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗者承擔，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗者承擔。

3. 產(chǎn)品特點(diǎn)

一、高效、靈敏、特異的抗ti；

二、穩定的重復性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類(lèi)型；

五、節省實(shí)驗經(jīng)費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準確度。比如水中總無(wú)機氯含量測定，樣品水中含有無(wú)機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機氯標準樣品，測定時(shí)忽略體積變化，如果測定出樣品中無(wú)機氯為29.8mg/L，則認為回收率為99%。

小鼠血栓調節蛋白(TM)ELISA試劑盒

操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。

實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?/span>1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

自動(dòng)洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗ti100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著(zhù)（coating）于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會(huì )與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結

c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專(zhuān)一的一次抗ti，與待測抗原進(jìn)行鍵結

d. 洗去多余未鍵結一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結

e. 洗去多余未鍵結二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

原理：針對抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著(zhù)于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗ti，則其會(huì )與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結。

c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗ti，與待測的一次抗ti鍵結。

d. 洗去多余未鍵結二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量。

原理：利用酶標記的抗抗ti以檢測已與固相結合的受檢抗ti。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著(zhù)于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結，由于塑膠孔盤(pán)上固著(zhù)的抗ti數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著(zhù)抗ti就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤(pán)上抗ti鍵結，即所謂競爭法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當需要偵測無(wú)法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著(zhù)于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì )考慮使用競爭法ELISA。

常見(jiàn)問(wèn)題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。

2、加樣中可能遇到的問(wèn)題。

3、洗板時(shí)容易造成誤差。

4、顯色問(wèn)題：使用了過(guò)期的顯色劑或者是顯色劑用過(guò)后放置時(shí)間太長(cháng)，都有可能造成顯色劑不顯色。

5、終止反應：在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡，造成假陽(yáng)性結果，所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。

6、讀板：讀板的時(shí)候首先應該保證板的清潔干凈。

訂購說(shuō)明:

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