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大鼠小腸血管內皮細胞我司竭誠為廣大科研用戶(hù)提供全面,優(yōu)質(zhì),價(jià)格優(yōu)勢的產(chǎn)品,免費為您提供全程技術(shù)指導,解決您的后顧之憂(yōu)。提供產(chǎn)品訂制包裝,免費快遞送貨上門(mén),質(zhì)量保證。我司產(chǎn)品齊全,因上架數量有限,未能全部上架,如需訂購或者產(chǎn)品詳情請直接聯(lián)系我司銷(xiāo)售!
聯(lián)系電話(huà):0755-28019324
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | RQ-Y20140 |
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規格 | 5×105cells | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 科研試驗 |
大鼠小腸血管內皮細胞需要準備好細胞所要用到的培養基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問(wèn)題存在,也會(huì )導致對細胞處理不當, 或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
大鼠小腸血管內皮細胞培養物的生理環(huán)境不同時(shí)定義為其物理化學(xué)環(huán)境中,更好地理解血清的組件,所必需的增殖的生長(cháng)因子的鑒定,并更好地理解細胞在培養的微環(huán)境(即,細胞 - 細胞相互作用,氣體的擴散,與基質(zhì)相互作用)現在允許在無(wú)血清培養基中某些細胞系的培養。
培養物的主要優(yōu)點(diǎn)是操縱物理化學(xué)(即,溫度,pH,滲透壓,O2和CO2張力)和生理環(huán)境(即,激素和營(yíng)養物濃度),其中所述細胞繁殖的能力。除溫度,將培養環(huán)境是由生長(cháng)培養基進(jìn)行控制。
對于培養,只要我們細心操作,注意細節,并不是大家說(shuō)的那樣困難。對于有經(jīng)驗和有條件的客戶(hù),建議由公司代為培養細胞及進(jìn)行后續研究。
細胞復蘇技術(shù):
1. 取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍
2. 吸出細胞懸液,并加10倍以上培養液
3. 1000r/分鐘離心5分鐘,去除上清
4. 用培養液適當稀釋后接種培養瓶,放入37℃ CO2培養箱靜置培養
5. 鏡檢細胞貼壁能力,次日更換一次培養液,繼續培養
培養方法:
收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀(guān)察整個(gè)細胞生長(cháng)情況:
如果細胞未長(cháng)滿(mǎn),用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無(wú)菌操作,打開(kāi)細胞培養瓶,留10ml培養液繼續培養。
如果細胞已長(cháng)滿(mǎn)(達80-90%)。即可進(jìn)行傳代,具體步驟如下:
a,棄去培養液,用PBS洗1-2次。
b,向瓶?jì)燃尤?.0-2.0ml酶液,在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取酶,加含有6ml 含10%血清的培養液,輕輕吹打細胞。
c,加入等量的的培養液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養
d,傳代比例:1:2-1:3
保存和應用:
客戶(hù)可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進(jìn)行后續的實(shí)驗操作。如是凍存細胞,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復蘇。
細胞復蘇的原則:
在實(shí)際操作中,凍存細胞要進(jìn)行復蘇,再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內,再次形成胞內結晶損傷細胞。
1)該細胞只能用于科研,不得用于臨床。
2)收到細胞后首先觀(guān)察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。
3)仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū),了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。
4)用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養過(guò)夜,隔天再取出觀(guān)察。此時(shí)多數細胞均會(huì )貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實(shí)細胞活力正常,請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無(wú)活力,請拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
5)請客戶(hù)用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶?jì)榷嘤嗟呐囵B基可收集備用,細胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶(hù)自備的培養基混合,使細胞逐漸適應培養條件;建議直接購買(mǎi)我司提供的培養基。
6)建議客戶(hù)收到細胞后qian3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。
細胞培養操作
1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。
3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無(wú)血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過(guò)數年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營(yíng)為一體的專(zhuān)業(yè)化生物工程公司。公司具有完善的實(shí)驗技術(shù)開(kāi)發(fā)平臺,成熟的抗原、抗體研發(fā)系統,熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結合公司的研發(fā)團隊,可以有效的保證公司產(chǎn)品強的穩定性和高的準確性,同時(shí)又具有競爭力的價(jià)格。 公司主營(yíng)ELISA試劑盒,目前可以提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗耗材等多門(mén)類(lèi)上萬(wàn)種產(chǎn)品,產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。
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