人尿道上皮細胞

人尿道上皮細胞需要準備好細胞所要用到的培養基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問(wèn)題存在，也會(huì )導致對細胞處理不當，  或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
人尿道上皮細胞培養物的生理環(huán)境不同時(shí)定義為其物理化學(xué)環(huán)境中，更好地理解血清的組件，所必需的增殖的生長(cháng)因子的鑒定，并更好地理解細胞在培養的微環(huán)境（即，細胞 - 細胞相互作用，氣體的擴散，與基質(zhì)相互作用）現在允許在無(wú)血清培養基中某些細胞系的培養。
培養物的主要優(yōu)點(diǎn)是操縱物理化學(xué)（即，溫度，pH，滲透壓，O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即，激素和營(yíng)養物濃度），其中所述細胞繁殖的能力。除溫度，將培養環(huán)境是由生長(cháng)培養基進(jìn)行控制。
對于培養，只要我們細心操作，注意細節，并不是大家說(shuō)的那樣困難。對于有經(jīng)驗和有條件的客戶(hù)，建議由公司代為培養細胞及進(jìn)行后續研究

細胞概述

細胞(英文名: cell) 并沒(méi)有統一的定義，比較普遍的提法是:細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細胞中才能體現。一般來(lái)說(shuō)， 細菌等絕大部分微生物以及原生動(dòng)物由一個(gè)細胞組成，即單細胞生物，高等植物與高等動(dòng)物則是多細胞生物。細胞可分為原核細胞、真核細胞兩類(lèi)，但也有人提出應分為三類(lèi)，即把原屬于原核細胞的古核細胞獨立出來(lái)作為與之并列的一 類(lèi)。研究細胞的學(xué)科稱(chēng)為細胞生物學(xué)。細胞體形極微，在顯微鏡下始能窺見(jiàn)，形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質(zhì)構成，表面有細胞膜。高等植物細胞膜外有細胞壁，細胞質(zhì)中常有質(zhì)體，體內有

葉綠體和液泡，還有線(xiàn)粒體。動(dòng)物細胞無(wú)細胞壁,細胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細胞中則無(wú)。細胞有運動(dòng)、營(yíng)養和繁殖等機能。

細胞特性:

1)組織來(lái)源于實(shí)驗動(dòng)物的正常胃組織。

2)細胞鑒定：廣譜（PCK）或細胞-19（CK-19）免疫熒光染色為陽(yáng)性。經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

4)細胞生長(cháng)方式：鋪路石狀細胞，不規則細胞，貼壁培養。

產(chǎn)品規格：>5×105細胞數

包裝規格：1ml凍存細胞懸液或T-25培養瓶

操作要點(diǎn)：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細胞能在1~2min內解凍，使細胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶?jì)?，補加適量的培養基，輕輕晃動(dòng)細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀(guān)察細胞貼壁生長(cháng)情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長(cháng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進(jìn)行后續的實(shí)驗。

細胞培養操作

1）復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無(wú)血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品的運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進(jìn)行培養，如無(wú)法立刻進(jìn)行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養瓶充滿(mǎn)培養基后進(jìn)行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

友情提示注意以下幾點(diǎn)：

1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清

2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養皿進(jìn)行傳代培養

3、如簽收時(shí)出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗室

深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過(guò)數年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營(yíng)為一體的專(zhuān)業(yè)化生物工程公司。公司具有完善的實(shí)驗技術(shù)開(kāi)發(fā)平臺，成熟的抗原、抗體研發(fā)系統，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結合公司的研發(fā)團隊，可以有效的保證公司產(chǎn)品強的穩定性和高的準確性，同時(shí)又具有競爭力的價(jià)格。 公司主營(yíng)ELISA試劑盒，目前可以提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗耗材等多門(mén)類(lèi)上萬(wàn)種產(chǎn)品，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。