庫蚊通用PCR檢測試劑盒

庫蚊通用PCR檢測試劑盒

特點(diǎn):

高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;

高靈敏度:檢測靈敏度可達10^100;

操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測:

高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

組成及配制

1、酶標板:-塊(96孔)

2、標準品 (凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5m1,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)

反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L, 然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不 要少于0.3m1 )200 U/L的 上述標準品加入含有0. 3m1樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。

特點(diǎn)優(yōu)勢:

1.所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)自建底大效據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢制，特異性均達到100%。

2.重現性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證，重現性為100%。

3.靈敏性:讀系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現對其的直接檢測,無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。

4.檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.序列資源豐富，除公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

該系列試制盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗證,憑借公同擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試制盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌樣的保守性驗征及40余種近緣準菌株和臨床菌株的特異性驗證確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酵與啟動(dòng)子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶錯式反應實(shí)驗中發(fā)現。DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本, PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。

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特點(diǎn)優(yōu)勢:

1.  特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實(shí)現對種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。

2. 重現性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證,重現性為100%。

3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中的濃度達到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現對其的直接檢測,無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。

4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。

5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。

庫蚊通用PCR檢測試劑盒

樣本采集、存放及運輸:

1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規方法采集。

2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過(guò)72h,-70℃以下可長(cháng)期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次)。

3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。

使用方法:

注:所有試劑使用前需解凍,混合均勻,6,000rpm離心數秒后使用。

1. 樣本處理(樣本處理區)

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說(shuō)明書(shū)。陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。

2. 擴增試劑準備(PCR前準備區)

取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區。

2.加樣(樣本處理區)

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區。

組成及試劑配制:

1、 酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,（加產(chǎn)品名稱(chēng)）混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

PCR檢測試劑盒特點(diǎn):

1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒樣品。

2.根據高腦脊譴炎病毒RT-保守序列設計的專(zhuān)一性引物, 與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應。

3.靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。

4.-管 式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。

5.本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

運輸及保存:

低溫運輸.-20°C保存,保存期限一年。

注意事項:

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會(huì )導致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì )在泳道中出現一大團拖尾亮帶，影響實(shí)驗結果。

4. 建議擴增片段長(cháng)度1 kb以?xún)?，以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并佩戴一次性手套操作。