維氏鞘氨醇單胞菌

維氏鞘氨醇單胞菌

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實(shí)驗內容:

1.稱(chēng)量>溶化→調pH >)過(guò)濾>分裝>加塞>包扎>滅菌>無(wú)菌檢查

2.干熱滅菌:裝入待滅菌物品升溫>恒溫>降溫>開(kāi)箱取物

3.高壓蒸汽滅菌加水>裝物品>加蓋>加熱>排冷空氣+加壓>恒壓>降壓回零》排汽>取物. >無(wú)菌檢查

4.過(guò)濾除菌:組裝滅菌>連接→壓濾>無(wú)菌檢查>清洗滅菌

低溫存法:

公司產(chǎn)品僅用于科研

①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1 ~2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達3~ 4個(gè)月;②液氮超di溫保存法,將生長(cháng)穩定期懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至-35℃時(shí)， 即可置于-150 ~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線(xiàn)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(cháng)期保存。

微生物菌種的培養:

維氏鞘氨醇單胞菌

1孢子制備

(1)放線(xiàn)菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基,培養基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機鹽等。碳源和氮源不要太豐富（碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養環(huán)境,不利于放線(xiàn)菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下， 干燥和限制營(yíng)養可直接或間接誘導孢子形成。放線(xiàn)菌斜面的培

養溫度大多數為28℃,少數為37 ℃,培養時(shí)間為5~ 14天。

(2)霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養,一般以大米、 小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產(chǎn)品為培養基。這是由于這些農產(chǎn)品中的營(yíng)養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類(lèi)培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養-般為25~ 28 ℃,培養時(shí)間為4~ 14天。

2種子制備

(1)搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jì)杉壟囵B,有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養基要求比較豐富,并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(cháng)。原則上各種營(yíng)養成分不宜過(guò)濃,子瓶培養基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養基配方。

(2)種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異，一般可分為一級種子、 二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養后形成大量的菌絲，這樣的種子稱(chēng)為一級種子， 把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱(chēng)為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,經(jīng)過(guò)培養形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級種子，將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵稱(chēng)為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級發(fā)酵。

脫水存法:

①沙土保存法,能產(chǎn)孢子的細菌、放線(xiàn)菌及霉菌可采用此法保存，即將沙和土以3:2比例混合經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內裝置高度為1cm滅菌2~ 3次,烘干后即可將在斜面培養基上生長(cháng)良好的孢子,用無(wú)菌蒸餾水2~ 2.5m制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中,經(jīng)真空抽干,外觀(guān)呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,保存期可達5 ~7年。

②冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑相混合, 放在安瓿管內于-20 -30℃的乙醇浴中速凍。然后,在低溫下用真空泵抽干,用干冰使水汽結凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達5~ 10年之久。

③石蠟油封存法,在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

菌種的具體保存方法

   微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個(gè)因素而設計的。

菌種保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養保藏法又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（后者作保藏厭氧細菌用），培養后于4—6℃冰箱內保存。

2．覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長(cháng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌，一方面可防止因培養基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

   載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

   寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養基上生長(cháng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5．冷凍保藏法可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

冷凍干燥保藏法先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。

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