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人造血干細胞我司品種齊全,可以為細胞培養上清夜,血清,血漿,尿液,組織液,心房水,體液標本等等。對每一位客戶(hù)追蹤服務(wù),因材施教,對產(chǎn)品不僅售前負責,售后更負責。我司竭誠為廣大科研用戶(hù)提供全面,優(yōu)質(zhì),價(jià)格優(yōu)勢的產(chǎn)品,免費為您提供全程技術(shù)指導,解決您的后顧之憂(yōu)。提供產(chǎn)品訂制包裝,免費快遞送貨上門(mén),質(zhì)量保證。
聯(lián)系電話(huà):0755-28019324
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | RQ-Y20158 |
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規格 | 株 | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 科研試驗 |
人造血干細胞
我司產(chǎn)品齊全,因上架數量有限,未能全部上架,如需訂購或者產(chǎn)品詳情請直接聯(lián)系我司銷(xiāo)售!
細胞培養步驟
1) 培養基及培養凍存條件準備:
1. 準備 McCOY's 5A 培養基(McCOY's 5A,SIGMA,貨號 M4892,添加 NaHC03 2.2g/L),90%;you質(zhì)胎牛血清,10%。
2. 培養條件:氣相:空氣,95%;碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液:90%培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2) 細胞處理:
復蘇細胞:將含有 lmL 細胞懸液的凍存管在 37°C 水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4分鐘,棄去上清液,補 加 l-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將 細胞懸液加入 l〇cm皿中,加入約 8ml 培養基,培養過(guò)夜)。隔天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存:
待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí),先要消化處理并進(jìn)行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法步驟進(jìn)行, 重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心,用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 lml 的數量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于 1X106個(gè)細胞凍存。
細胞接受后的處理:
1. 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài),去掉封口膜并將 T25瓶置于 37°C 培養約 2-3h〇
3. 棄去 T25瓶中的培養基,添加 6ml 本公司附帶的培養基。
4. 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)(90%以上)請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代,傳代培養用 6ml 本公司附帶的培養基。
5. 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現污染或疑似污染,請及時(shí)與我們取得聯(lián)系。
人造血干細胞
培養方法:
收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀(guān)察整個(gè)細胞生長(cháng)情況:
如果細胞未長(cháng)滿(mǎn),用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無(wú)菌操作,打開(kāi)細胞培養瓶,留10ml培養液繼續培養。
如果細胞已長(cháng)滿(mǎn)(達80-90%)。即可進(jìn)行傳代,具體步驟如下:
a,棄去培養液,用PBS洗1-2次。
b,向瓶?jì)燃尤?.0-2.0ml酶液,在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取酶,加含有6ml 含10%血清的培養液,輕輕吹打細胞。
c,加入等量的的培養液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養
d,傳代比例:1:2-1:3
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心 5分鐘,棄去上清液,補加 l-2mL 培養液后吹句,將細胞懸液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培 養基的 新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細 胞懸 液按 1: 2到 1: 3的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn):
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿(mǎn)37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細胞能在1~2min內解凍,使細胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶?jì)?,補加適量的培養基,輕輕晃動(dòng)細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)隔天觀(guān)察細胞貼壁生長(cháng)情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長(cháng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進(jìn)行后續的實(shí)驗。
友情提示注意以下幾點(diǎn):
1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清
2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞換液后放置培養箱孵育到隔天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養皿進(jìn)行傳代培養
3、如簽收時(shí)出現培養瓶壁破裂,漏液等情況請及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗室
細胞用途:僅供科研使用。
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