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ELISA實(shí)驗是我們大家最常見(jiàn)的實(shí)驗,也是比較容易出問(wèn)題的實(shí)驗,可能你一不小心,你的整個(gè)實(shí)驗便是無(wú)功能重來(lái)那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實(shí)驗的時(shí)候,有些細節若是做不好會(huì )出現實(shí)驗異常,或者效果不佳,那么你有想過(guò)是什么原因嗎?
一、白板異常:顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對照不顯色。
1. 試劑已過(guò)效期,或不同試劑盒組分混用(解決方式:檢查試劑的組分及批號,確認未過(guò)期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用)。
2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B(解決方式:嚴格按說(shuō)明書(shū)的步驟操作,加完試劑后可觀(guān)察一下液面高度是否一致,以減少漏加現象)。
3. 洗板及加樣過(guò)程中,酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力(解決方式:確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈)。
4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配制(解決方式:每次配制時(shí)都應看清標簽標明物質(zhì))。5. 蒸餾水有問(wèn)題(解決方式:確認配制洗液的純化水達到要求且未污染,與好蒸餾水比較)?!わ@色弱、靈敏度低:實(shí)驗結束后,包括陽(yáng)性對照、質(zhì)控在內的所有板孔顏色均較淡。
二、陰陽(yáng)性對照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽(yáng)性標本未能檢出。
1. 未達要求的孵育溫度及孵育時(shí)間可檢出強陽(yáng)性標本,但質(zhì)控或弱陽(yáng)性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出(解決方式:質(zhì)控品或標本避免反復凍融。標本在一周內使用的,可存于 2-8℃,如需長(cháng)期保存,應置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應小量分裝,并置于-20℃以下保存)。
2. 質(zhì)控品或標本高溫放置過(guò)久,或被反復凍融致待測物滴度下降,而未能檢出(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。
3. 儀器設定不正確,濾光片不匹配(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。
三、實(shí)驗結束后,陰陽(yáng)性對照正常,質(zhì)控正常,但臨床標本感覺(jué)顯色較弱
1. 待測標本中可能不含強陽(yáng)性標本,故結果可能是正常的(解決方式:如有懷疑,可復檢)。
2. 標本加入疊氮鈉作為防腐劑(解決方式:酶免實(shí)驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑)。
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